紫外分光光度法測(cè)定*含量

關(guān)鍵詞：分光光度法；*；美析儀器; UV-1500

【原理】

H₂O₂與硫酸鈦（或氯化鈦）生成過氧化物—鈦復(fù)合物黃色沉淀，可被H_２SO₄溶解后，在415nm波長(zhǎng)下比色測(cè)定。在一定范圍內(nèi)，其顏色深淺與H₂O₂濃度呈線性關(guān)系。

【儀器和用具】

研缽；移液槍0.2ml和槍頭，5ml×1支；容量瓶10ml×7個(gè)，離心管5ml×8支；離心機(jī)；UV-1500型紫外可見分光光度計(jì)。

【試劑】

100μmol/L H₂O₂試劑；2mol/L硫酸；5%（W/V）硫酸鈦；丙酮；濃氨水。

30% H₂O₂指的是*溶液的質(zhì)量比,其密度為1.1g/cm3,而*的分子量是34.02,通過這些參數(shù)，我們可以推算出30%的*的摩爾濃度為9.7mol/L.

【方法】

1.制作標(biāo)準(zhǔn)曲線：取10ml離心管7支，順序編號(hào)，并按表40-1加入試劑。

表40-1  測(cè)定H₂O₂濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線配置表

待沉淀*溶解后，將其小心轉(zhuǎn)入10ml容量瓶中，并用蒸餾水少量多次沖洗離心管，將洗滌液合并后定容至10ml刻度，415nm波長(zhǎng)下比色。

2.樣品提取和測(cè)定：(1)稱取新鮮植物組織2~5g（視H₂O₂含量多少而定），按材料與提取劑1∶1的比例加入4℃下預(yù)冷的丙酮和少許石英砂研磨成勻漿后，轉(zhuǎn)入離心管3000 r/min下離心10min，棄去殘?jiān)锨逡杭礊闃悠诽崛∫骸?2)用移液管吸取樣品提取液1ml，按表35-1加入5%硫酸鈦和濃氨水，待沉淀形成后3000rpm/min離心10min，棄去上清液。沉淀用丙酮反復(fù)洗滌3～5次，直到去除植物色素。(3)向洗滌后的沉淀中加入2mol硫酸5ml，待*溶解后，與標(biāo)準(zhǔn)曲線同樣的方法定容并比色。

3.結(jié)果計(jì)算：

植物組織中H₂O₂含量(μmol/g Fw)=

式中  C—標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得樣品中H₂O₂濃度（μmol）；

          V_t—樣品提取液總體積（ml）；

          V₁—測(cè)定時(shí)用樣品提取液體積（ml）；

          FW—植物組織鮮重（g）。